NiFast小量细菌基因组DNA提取试剂盒(柱型)

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产品简介：

裂解液直接加入LB培养菌体，通过高效蛋白沉淀液沉淀蛋白，然后通过结合液调节结合条件，高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。得到的DNA 比传统试剂盒纯度更高，可直接用于酶切、转化、测序及PCR 等分子生物学实验。

产品特点：

■ 快 速：节省时间，可重复性好。

■ 简 单：操作简单，步骤少。

储存条件和保质期：室温（15-25℃）放置，可保存18个月。

试剂盒组成：

使用前准备：

1.第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

2.需自备无水乙醇或95%乙醇。如需消化RNA可自备RNA酶；G+阳性菌提取需自备溶菌酶。

3.开始实验前根据需要将水浴锅或干热器预热到37℃或者65℃备用。

操作步骤：

1. 取500μL过夜培养菌液（OD600=4-5）放入离心管,加入100μL裂解液NB，上下混匀菌体。提示：对于革兰氏阳性菌(G+):可加入20μL溶菌酶 (50mg/mL)颠倒混匀，37℃温育20分钟。如果菌体浓度太低可多次离心收集后补足TE或培养菌液至500μL,旋涡重悬菌体。

2. 将离心管65℃放置5min，直到溶液变成澄清透明粘稠液体。提示：如果不变澄清表明裂解不充分，应当减少起始菌体用量。如果RNA残留较多，需要去除RNA，可以加10μL RNase A(20mg/ml)溶液混匀,37℃放置5min。

3. 冷却后缓慢加入250μL沉淀液NC，在涡旋振荡器上高速连续振荡混匀30秒,混匀后可能见到一些小的分散蛋白团块。

4. 12,000rpm离心5min,这时候应该可以见到管底/壁的蛋白沉淀，也可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面。

5. 小心吸取700μL上清到一个新的1.5mL离心管中。 提示: 吸取上清时，注意不要吸到管底和漂浮在液体表面的蛋白沉淀。如果不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中，可再次离心2min后取上清。

6. 缓慢加入700μL等体积的结合液ND，涡旋振荡充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。提示：上述步骤中立刻涡旋或者吹打充分混匀非常重要，混匀不充分严重降低产量，必要时如样品粘稠不易混匀时可以涡旋振荡15秒混匀。如果要提高产量可以多吸取更多上清，并增加结合液的量，保持等体积，分几次上柱子。

7. 将上一步混合物分2次（每次700μL）加入吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm离心1min，倒掉收集管中的废液。

8. 加入500μL漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm 离心1min，弃掉废液。

9. 加入500μL漂洗液WB，12,000 rpm 离心1min，弃掉废液。

10. 将吸附柱CB3放回空收集管中，12,000 rpm离心1min，尽量除去漂洗液，以免残留乙醇抑制下游反应。取出吸附柱CB3，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加50μL洗脱缓冲液EB，室温放置2min，12,000 rpm 离心1min。提示：洗脱体积越大，洗脱率越高，如果需要高浓度DNA，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于30μL，体积过小会降低DNA洗脱效率，DNA产量减少。DNA可以存放在4℃；如果要长时间存放，可以放置在－20℃或-80℃。

说明：500微升BL21DE3提取，50微升洗脱。未用RNase A消化RNA。

说明书下载：NiFast小量细菌基因组DNA提取试剂盒(柱型) .pdf

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