NiFast指示剂型质粒大量提取试剂盒(柱型)

NiFast指示剂型质粒大量提取试剂盒(柱型)

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产品名称

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规 格

价 格

NiFast指示剂型质粒大量提取试剂盒(柱型)

FP3072

10次

880元

质粒提取指示剂

FP3072-1

1mL

180

产品简介:

本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞,加入指示剂,能够判断裂解和中和效果,防止中和不完全造成产量降低,离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。得到的DNA 比传统试剂盒纯度更高,可直接用于酶切、转化、测序及PCR 等分子生物学实验。

产品特点:

■ 快 速:节省时间,可重复性好。

■ 简 单:操作简单,步骤少。

储存条件保质期:室温(15-25℃)放置,可保存18个月。

试剂盒组成:

试剂盒组成

保存

10次

RNaseA(10mg/mL)

室温

750μL

溶液P1(无色)

室温

75mL

溶液P2 (蓝色)

室温

75mL

溶液NP3(黄色)

室温

100mL

漂洗液WB

室温

20mL×2瓶

使用前请加入指定量的无水乙醇(4倍)

洗脱缓冲液EB

室温

20mL

吸附柱PD7-50 &收集管(50mL)

室温

10T

说明书

室温

1份

使用前准备:

1.第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!

2.RNase A全部加入溶液P1中,混匀,每次使用后置于2-8℃保存。

操作步骤:

  1. 100-200毫升过夜培养的菌液,6000xg,离心10min,尽可能的倒干上清,收集菌体收集超过50毫升菌液,可以离心弃上清后,在同一个50mL管内加入更多的菌液,重复步骤1,直到收集到足够的菌体

    2.7mL溶液P1(无色)重悬菌体沉淀,涡旋振荡至彻底悬浮。(如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。)

    3.7mL的溶液P2(蓝色),温和地上下翻转5-10次使菌体充分裂解,室温放置4min(温和地混合,不要剧烈震荡,以免基因组DNA断裂!所用时间不应超过5min!以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠淡蓝色,如果未变清亮淡蓝色,可能由于收集菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体用量)

    4.10mL溶液P3(黄色),立即温和地上下翻转5-10次,充分混匀时会出现浅黄色絮状沉淀。4℃ ,至少2500xg离心10min(加大离心力可相应缩短离心时间,如8000xg离心5min),小心取上清,避免吸取到漂浮的浅黄色沉淀。加入溶液NP3后应该立即混匀,以免产生SDS的局部沉淀。如果上清中还有微小浅黄色沉淀,可再次离心后取上清。)

    5. 将上一步所得上清15mL加入吸附柱PD7-50中(吸附柱放入收集管中),静置2min2500xg离心2min,倒掉收集管中的废液。(如果上清体积超过15mL,可以分多次过柱。

    6. 加入10mL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!)2500xg离心2min,弃掉废液。

    7. 再次加入10mL漂洗液WB,2500xg离心2min,弃掉废液。

    8. 吸附柱PD7-50放回空收集管中,2500xg离心2min,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

    9. 取出吸附柱PD7-50,放入一个干净的50mL离心管中,在吸附膜的中间部位1-2mL洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在 65℃水浴中预热效果更好),室温放置2min6000 xg离心2min。如果需要较多量质粒,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,离心2min(洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要质粒浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积不应少于1mL,体积过小降低质粒洗脱效率,减少质粒产量。)

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图1: 1mL第一次洗脱,PUC19质粒DNA

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图1: 1mL第二次洗脱,PUC19质粒DNA

建议:核酸浓度测定结果表明1ML洗脱体积不是很完全,需要更多质粒应加大洗脱体积。

质粒大量提取试剂盒(柱子吸附法)常规产量参考范围200ug-1mg之间,具体根据质粒性质有所差别,实际情况请自行测试研究。


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