NiFast指示剂质粒小量快速提取试剂盒(柱型)

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产品简介：

本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，添加颜色指示剂，便于高效判断裂解和中和过程，高效去除抑制物等杂质，离心时间短，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。得到的DNA 比传统试剂盒纯度更高，可直接用于酶切、转化、测序及PCR 等分子生物学实验。

产品特点：

■ 快 速：节省时间，可重复性好。

■ 简 单：操作简单，步骤少。

■ 高 效：可提取菌体90% 以上菌株质粒DNA。

储存条件和保质期：室温（15-25℃）放置，可保存18个月。

试剂盒组成：

使用前准备：

1.第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

2.将自备的RNase A（10mg/mL） 全部加入溶液P1中，混匀，每次使用后置于2-8℃保存。

操作步骤：

1.取1.5-4.5mL过夜培养的菌液，12,000rpm离心1min，尽可能的倒干上清，收集菌体。（收集超过1.5mL菌液，可以离心弃上清后，在同一个1.5mL管内加入更多的菌液，重复步骤1，直到收集到足够的菌体。菌体不宜过多，以免造成裂解不充分降低产量，如产量过低可自行加大或减少菌体用量）

2. 用250μL溶液P1重悬菌体沉淀，涡旋振荡至彻底悬浮。(如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。)

3. 加250μL的溶液P2，温和地上下翻转5-10次使菌体充分裂解，室温放置4min。(此时菌液应变得清亮粘稠淡蓝色，如果未变清亮，可能由于收集菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体用量。)

4.加350μL溶液NP3，立即温和地上下翻转5-10次，充分混匀时会出现蓝色完全消失表明中和完全，此时会出现浅黄色色絮状沉淀。12,000rpm离心1min，小心取上清。

5.将上一步所得上清加入吸附柱P5-50中（吸附柱放入收集管中）12,000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液。

6. 加入500μL漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!）12,000rpm 离心1min，弃掉废液。

7. 再次加入500μL漂洗液WB，12,000rpm 离心1min，弃掉废液。

8.将吸附柱P5-50放回空收集管中，12,000rpm离心1min，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

9. 取出吸附柱P5-50，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加50-100μL洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液可在 65℃水浴中加热效果更好），室温放置1min，12,000rpm 离心1min。如果需要较多质粒，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，离心1min。(洗脱体积越大，洗脱效率越高。如果需要质粒浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于30μL，体积过小降低质粒洗脱效率，减少质粒产量。)

全程设置运行12000rpm，1min，省去多次设置参数问题

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