ABpure质粒小量提取试剂盒(柱型)

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订购货号: 

产品名称 

目录号 

规 格 

价 格 

ABpure质粒小量提取试剂盒(柱型) 

AB3001 

50次 

120元 

ABpure质粒小量提取试剂盒(柱型) 

AB3002 

100次 

220元 

产品简介: 

本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞,离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。得到的DNA 比传统试剂盒纯度更高,可直接用于酶切、转化、测序及PCR 等分子生物学实验。 

产品特点: 

■ 快 速:节省时间,可重复性好。 

■ 简 单:操作简单,步骤少。 

■ 高 效:可提取菌体90% 以上菌株质粒DNA。 

储存条件保质期:室温(15-25℃)放置,可保存18个月。 

试剂盒组成: 

试剂盒组成 

保存 

50次 

100次 

RNaseA(10mg/mL 

室温 

125μL 

250μL 

溶液P1 

室温

12.5mL 

25mL 

溶液P2 

室温 

12.5mL 

25mL 

溶液P3 

室温 

17.5mL 

35mL 

漂洗液WB 

室温 

12mL           20mL 

第一次使用前按说明加指定量乙醇(4倍) 

洗脱缓冲液EB 

室温 

15mL 

15mL 

吸附柱CP3 &收集管(2mL

室温 

50T

100T 

说明书

室温 

1份

1份

使用前准备:

  1. 第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!

  2. RNase A全部加入溶液P1中,混匀,每次使用后置于2-8℃保存。

 

操作步骤:

  1. 1.5-4.5mL过夜培养的菌液,12,000rpm离心1min,尽可能的倒干上清,收集菌体。收集超过1.5mL菌液, 可以离心弃上清后,在同一个1.5mL管内加入更多的菌液,重复步骤1,直到收集到足够的菌体

  2. 250μL溶液P1重悬菌体沉淀,涡旋振荡至彻底悬浮。(如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。)

  3. 250μL的溶液P2,温和地上下翻转5-10次使菌体充分裂解,室温放置4分钟。(温和地混合,不要剧烈震荡,以免基因组DNA断裂!所用时间不应超过5分钟!以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠,如果未变清亮,可能由于收集菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体用量)

  4. 350μL溶液P3,立即温和地上下翻转5-10次,充分混匀时会出现白色絮状沉淀。12,000rpm离心10分钟,小心取上清。(加入溶液P3后应该立即混匀,以免产生SDS的局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。)

  5. 将上一步所得上清加入吸附柱CP3中(吸附柱放入收集管中)12,000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液。

  6. 加入500μL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!)12,000rpm 离心1min,弃掉废液。

  7. 再次加入500μL漂洗液WB,12,000rpm 离心1min,弃掉废液。

  8. 吸附柱CP3放回空收集管中,12,000rpm离心2min,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

  9. 取出吸附柱CP3,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加50-100μL洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液 65℃水浴中加热效果更好),室温放置2min12,000rpm 离心1min。如果需要较多质粒,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,离心1分钟。(洗脱体积越大,洗脱效率越高。如果需要质粒浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积不应少于30μL,体积过小降低质粒洗脱效率,减少质粒产量)