核酸纯化柱的选择专题2：核酸纯化柱不同层（膜厚度）洗脱效率的比较；交流咨询QQ:1492876083
本测试方法：
通过质粒提取试剂盒测试不同厚度的硅胶膜，用50，100，150微升洗脱测定洗脱效率
实验室设计
1：选择实际层数为2,3,4,5,6,7,8,9,10层（1mm厚，相当于市场厚度的一倍，市场大多是0.5mm厚膜，可自行拆解观察厚度，不同公司厚度不一样）
2：先用50微升体积洗脱测定一次浓度；然后将样品补充50微升洗脱缓冲液，将其从新加入核酸纯化柱洗脱测定浓度；第二次补充50微升洗脱缓冲液，将150微升缓冲液加入到核酸纯化柱再次洗脱测定浓度，测试硅胶膜的洗脱效率。
3：起始浓度的菌液选取3mL测试（不同收集浓度的菌产量有差别，后面我们将进行测试）
4：选择含PUC19质粒的DH5A菌作为提取对象。
实验材料：
含PUC19质粒DH5A菌株，分光光度计 。
实验方法
按照艾比根质粒小量提取试剂盒提取过夜培养的菌液，测定浓度。
实验结果数据分析：
PUC19质粒提取原始测量浓度数据：
|
膜层数 |
洗脱 体积 |
货号 |
260/280 |
260/230 |
Conc. (Ng/ul) |
|
2层 |
50ul |
P2-50/500/5000 |
1.98 |
2.23 |
333.1 |
|
3层 |
50ul |
P3-50/500/5000 |
2.03 |
2.25 |
260.1 |
|
4层 |
50ul |
P4-50/500/5000 |
2.02 |
2.24 |
266.7 |
|
5层 |
50ul |
P5-50/500/5000 |
2.01 |
2.2 |
251.9 |
|
6层 |
50ul |
P6-50/500/5000 |
2.02 |
2.26 |
267.1 |
|
7层 |
50ul |
P7-50/500/5000 |
2.02 |
2.24 |
268.5 |
|
8层 |
50ul |
P8-50/500/5000 |
1.98 |
2.19 |
290 |
|
9层 |
50ul |
P9-50/500/5000 |
2.0 |
2.21 |
272.3 |
|
10层 |
50ul |
P10-50/500/5000 |
1.98 |
2.18 |
289.4 |
|
2层 |
100ul |
P2-50/500/5000 |
2.09 |
2.24 |
163.5 |
|
3层 |
100ul |
P3-50/500/5000 |
2.07 |
2.2 |
155.9 |
|
4层 |
100ul |
P4-50/500/5000 |
2.1 |
2.23 |
166.1 |
|
5层 |
100ul |
P5-50/500/5000 |
2.08 |
2.21 |
165.8 |
|
6层 |
100ul |
P6-50/500/5000 |
2.1 |
2.24 |
161.7 |
|
7层 |
100ul |
P7-50/500/5000 |
2.1 |
2.24 |
177.8 |
|
8层 |
100ul |
P8-50/500/5000 |
2.07 |
2.2 |
177.3 |
|
9层 |
100ul |
P9-50/500/5000 |
2.08 |
2.21 |
176.3 |
|
10层 |
100ul |
P10-50/500/5000 |
2.08 |
2.22 |
182.5 |
|
2层 |
150ul |
P2-50/500/5000 |
2.1 |
2.18 |
117.4 |
|
3层 |
150ul |
P3-50/500/5000 |
2.11 |
2.21 |
111.7 |
|
4层 |
150ul |
P4-50/500/5000 |
2.12 |
2.24 |
114.2 |
|
5层 |
150ul |
P5-50/500/5000 |
2.12 |
2.25 |
116.3 |
|
6层 |
150ul |
P6-50/500/5000 |
2.14 |
2.26 |
112 |
|
7层 |
150ul |
P7-50/500/5000 |
2.12 |
2.23 |
123.1 |
|
8层 |
150ul |
P8-50/500/5000 |
2.13 |
2.27 |
119.9 |
|
9层 |
150ul |
P9-50/500/5000 |
2.15 |
2.28 |
122.9 |
|
10层 |
150ul |
P10-50/500/5000 |
2.11 |
2.25 |
130.3 |
图1 膜厚度和洗脱体积比较
|
洗脱体积（图1） |
平均浓度（ng/ul）） |
备注 |
|
50ul洗脱 |
250 |
3ml菌液测试 |
|
100ul洗脱 |
150 |
3ml菌液测试 |
|
150ul洗脱 |
100 |
3ml菌液测试 |
|
洗脱体积 |
总产量 |
备注 |
|
50ul洗脱 |
12 |
3ml菌液测试 |
|
100ul洗脱 |
16 |
3ml菌液测试 |
|
150ul洗脱 |
18 |
3ml菌液测试 |
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洗脱体积 |
洗脱效率 |
备注 |
|
50ul洗脱 |
75% |
3ml菌液测试 |
|
100ul洗脱 |
95% |
3ml菌液测试 |
|
150ul洗脱 |
相对比较，假设100% |
3ml菌液测试 |
结果分析及建议：
-
对于需要50ul洗脱体积的建议选择P2-P5厚度的膜，可以满足高浓度要求。
-
对于洗脱体积大于50建议选择p6-10的膜，产量增加。
-
其它厚度的刻自行研究测试。
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不同菌液和质粒提取含量有所差别，具体选择生产企业可自行测试。
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50ul洗脱效率大致75%，100ul洗脱效率大致95%。建议洗脱体积控制50-100ul左右，可增加洗脱效率。
-
对于不同配方试剂盒提取样品洗脱效率会有所差别，具体可自行测试研究。
说明：本次实验仅供参考，只是本实验室实验员操作测试对比数据，不同使用环境请自行研究测试。
